Análisis de articulo de epilepsia con técnica de PCR

 La epilepsia refractaria ocupa casi 30% de todos los tipos de epilepsia. Polimorfismos y mutaciones de determinados genes se relacionan con la fisiopatología y respuesta al tratamiento en epilepsia, principalmente en su asociación a canales iónicos. Los canales iónicos tienen funciones como controlar y mantener potenciales de acción en membranas celulares, por lo que mutaciones en genes que codifican para estos canales son factores relacionados con la refractariedad.

Tema: Análisis genético de la subunidad alfa del canal de sodio dependiente de voltaje (SCN1A) en pacientes pediátricos con epilepsia refractaria

Objetivos: Analizar el gen de la subunidad alfa del canal de sodio dependiente de voltaje (SCN1A) en pacientes pediátricos con epilepsia refractaria, tratados en el Centro Médico Nacional “20 de Noviembre”.

Muestra: Sangre periférica

Ácido nucleico: ADN genomico

Extracción: Las condiciones de la PCR fueron las siguientes: Previo calentamiento a 95 °C por 3 minutos, desnaturalización a 94 °C durante un minuto, 35 ciclos con una alineación a 60 °C por un minuto, elongación a 72 °C durante un minuto y medio, y extensión final a 72 °C durante 7 minutos. Los productos de PCR se colocaron en un gel de agarosa al 2% y fueron separados con base en el desplazamiento de la molécula (DNA) cargada en un campo eléctrico, cada corrimiento estuvo acompañado por un marcador de peso molecular de 100 pb. A través de este método fue posible observar, en un transiluminador de luz ultravioleta, la amplificación de las tres porciones del exón 26 del gen SCN1A de acuerdo con el tamaño esperado (fragmento a: 589 pb, fragmento b: 418 pb y fragmento c: 592 pb, respectivamente). Se purificaron los fragmentos amplificados por elusión, con el kit QIAquick QIAGEN.

Gen: SCN1A  26a sentido (AGG ACT CTG AAC CTT ACC TTG G), 26a antisentido (TGT AGA TGT TCA CCA CAA CCA G), 26b sentido (TGT GGG AAC CCA TGT GTT G), 26b antisentido (CCA TGA ATC GCT CCT CGA TC), 26c sentido (TGC TTT TAC AAA GCG GGT TC) y 26c antisentido (GTT TGC TGA CAA GGG GTC AC)

Tipo PCR: PCR de punto final y secuenciación directa.

Visualización: electroforesis y espectrofotometría  



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